免疫熒光
免疫熒光實驗流程
一.脫蠟至水
1. 二甲苯Ⅰ(8min)
2. 二甲苯Ⅱ(8min)
3. 無水乙醇和二甲苯1:1(5min)
4. 無水乙醇(3min)
5. 95%乙醇(3min)
6. 85%乙醇(3min)
7. 75%乙醇(3min)
8. PBS洗3遍
二．抗原修復
EDTA抗原修復液修復。
抗原修復100℃ 20min ; 自然冷卻至室溫。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每張切片加1滴，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封閉 3-5%BSA或者1-2%FBS封閉30min
六．除去封閉液，每張切片加1滴或50μl的第一抗體，室溫下孵育60分鐘或4℃過夜，建議參見每種抗體的說明書。
抗體稀釋液： 1%FBS溶液（可以加0.01%疊氮鈉）
七．洗一抗。PBS洗3遍，每次5min。
八．孵二抗2h(室溫)FITC標記 山羊抗小鼠二抗1:500，CY3標記的山羊抗兔二抗1：500。
九．洗二抗 PBS洗3遍，每次5min
十．擦干標本邊緣水分，加DAPI（1ug/ml）5min
十一. 把片子放PBS里，取一張擦干水分，加mouting（sigma M1289）,蓋上蓋玻片，指甲油封片。
